Media Kitchen

The Media Kitchen is responsible for the preparation of culture media, buffers etc. All the recipies we use have been produced by researchers and researchgroup's advices. When needed, we'll create more.

The Media Kitchen facility is primarily for the use of the Institute of Biotechnology’s own research groups. Others are served only by separate agreement. If needed, contact the staff of the kitchen.
Contact information

Institute of Biotechnology
Media Kitchen
P.O.Box 56
00014 University of Helsinki
Finland

Visiting address: Viikinkaari 5, room 3014b, Biocenter 2

Personnel

Osmo Rentola +358 02941 58950

Sami Karja +358 02941 59392

E-mail: elatusainelaboratorio@helsinki.fi

University of Helsinki Business Identity Code: FI-03134717
Ordering info

Sign and date your orders.

When you need:

  • a big amount of solution (>4000 ml), you have to make an order 3 weekdays before (including milliQ-water!).
  • more than 20 plates, you have to make an order.

Reserve at least 3 weekdays delivery time for your order.

Bring solutions for autoclaving to the lab xxxx latest 9 o’clock in the morning.

 (in Flamma intranet)
Recipies / Reseptit (in Finnish only)

LB-AGAR

Punnitaan komponenteista: 

  • 9 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 4.5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 13.5 g Agar HISPANLAB H1800
  • 4.5 g NaCl RIEDEL 31434
  •  ad. 900 ml MilliQ H2O

Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon. Liuotetaan ja autoklavoidaan. Säilytys + 4° C:ssa.

Ready mixistä: Punnitaan 35 g/l Hispanlab H 1083 Ready Mixiä, koostumukseltaan sama kuin komponenteista punnittu. Keitetään ja autoklavoidaan.

LB-maljat + haluttu antibiootti

LB-agar sulatetaan kattilassa. Jäähdytetään LB-agar vesihauteessa + 55° C:een. Lisätään tarvittava määrä haluttua antibioottia tarvitun konsentraation saamiseksi LB-agariin. Valetaan maljat. Litrasta LB-agaria tulee noin 40 maljaa.

Luria-Bacmid -maljat

  • 10 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 12 g Agar HISPANLAB H1800
  • 10 g NaCl (high salt) RIEDEL 31434
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O

Antibiotic Stock conc.300 ml 500 ml 1000 ml Final conc.

Kanamycin 10 mg/ml 1,5 ml 1,5 ml 5,0 ml 50 µg/ml

Gentamycin 10 mg/ml 210 µl 350 µl 700 µ l7 µg/ml

Tetracycline 2 mg/ml 1,5 ml 2,5 ml 5 ml 10 µg/ml

IPTG 40 mg/ml 300 µl 500 µl 1 ml 40 µg/ml

X-Gal 20 mg/ml 1,5 ml 2,5 ml 5 ml 100 g/ml

Antibioottistokkien valmistus

Kaikki antibioottistokit punnitaan ja liuotetaan vetokaapissa, suojakäsineet kädessä ja äärimmäistä huolellisuutta noudattaen.

Antibioottistokkiliuokset valmistetaan liuottamalla antibiootti esim. ampicillin, kanamycin jne. milliQ-veteen ja steriilisuodatetaan 0,2 mm suodattimella. Antibiooteista; chloramphenicol ja erythromycin liuotetaan etanoliin, joten niitä ei tarvitse steriilisuodattaa. Liuotetaan juuri ennen käyttöä. Rifampicin -stokki valmistetaan liuottamalla N,N-dimetyyliformamidiin (RIEDEL 33120) tai dimetyylisulfoksidiin (DMSO) (ICN 190186). Liuotetaan juuri ennen käyttöä, ei steriilisuodateta. X-Gal valmistetaan liuottamalla N,N-dimetyyliformamidiin, ei steriilisuodateta. Kaikki antibioottistokit säilytetään –20°C:ssa. Gentamycin säilytetään +4°C:ssa.
Huomiotavaa: maljat, joissa on antibiootteja tulee säilyttää +4°C:ssa. Maljat, joissa on tetrasykliiniä ja/tai X-Galia ja/tai IPTG:tä ja/tai zeociniä ja/tai G418:a säilytetään valolta suojattuna +4°C:ssa.

"Taulukko"

LB-MEDIUM

Punnitaan komponenteista:

  • 10 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 5 g NaCl RIEDEL 31434
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon. Liuotetaan ja autoklavoidaan. Säilytys + 4° C:ssa.

Ready mixistä: Punnitaan 20 g/l Hispanlab H 1231 Ready Mixiä, koostumukseltaan sama kuin komponenteista punnittu.

2 x LB-MEDIUM

  • 20 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 10 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 10 g NaCl RIEDEL 31434
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon. Liuotetaan ja autoklavoidaan. Säilytys + 4° C:ssa. Punnitaan 40 g/l Hispanlab H 1231 Ready Mixiä, koostumukseltaan sama kuin komponenteista punnittu.

M9-AGAR

Liuos A:
  • 7.2 g Na2HPO4 x 2 H2O J.TBAKER 0326
  • 3.0 g KH2PO4 MERCK 4871
  • 0.5 g NaCl RIEDEL 31434
  • 1.0 g NH4Cl MERCK 1145
  •  ad. 500 ml MilliQ H2O 

Säädetään liuoksen pH 7.4:ksi NaOH:lla tai HCl:lla (lähtöpH 6,9; 5 M NaOH ~2 ml). Liuos autoklavoidaan

Liuos B:
  • 15 g Agar HISPANLAB H1800
  •  ad. 500 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Liuokset A ja B jäähdytetään + 55° C:een.

Liuokseen A lisätään aseptisesti seuraavat erikseen steriloidut liuokset. CaCl2 lisätään kuumaan liuokseen pisara kerrallaan.

  • 2 ml 1 M MgSO4 MERCK 5886
  • 10 ml 20 % glucose ICN 194672
  • 0.5 ml 1 % thiamine ICN 194749
  • 0.1 ml 1 M CaCl2 MERCK 2382

Liuokset A ja B yhdistetään ja valetaan maljat.

M9-MEDIUM

  • 7.2 g Na2HPO4 x 2 H2O J.T.BAKER 0326
  • 3.0 g KH2PO4 MERCK 4871
  • 0.5 g NaCl RIEDEL 31434
  • 1.0 g NH4Cl MERCK 1145
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Säädetään liuoksen pH 7.4:ksi NaOH:lla tai HCl:lla (lähtöpH 6,9 ; 5 M NaOH ~2 ml). Liuos autoklavoidaan. Jäähdytetään + 55° C:een.

Litraan liuosta lisätään aseptisesti seuraavat erikseen steriloidut liuokset. CaCl2 lisätään kuumaan liuokseen pisara kerrallaan.

  • 2.0 ml 1 M MgSO4 MERCK 5886
  • 10 ml 20 % glucose ICN 194672
  • 0.5 ml 1 % thiamine ICN 194749
  • 0.1 ml 1 M CaCl2 MERCK 2382

SOB-medium

Punnitaan komponenteista:

  • 20 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 5  extract HISPANLAB H1702
  • 0.58 g NaCl RIEDEL 31434
  • 0.19 g KCl RIEDEL 31248
  • 2.03 g MgCl2 x 6 H2O MERCK 5833
  • 2.46 g MgSO4 x 7 H2O MERCK 5886
  •  ad.1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH:n tulee olla 6.8 - 7.8.(ei tarvitse säätää). Liuos autoklavoidaan. Säilytys + 4° C:ssa.

Ready mixistä: Punnitaan 30,7 g/l Hispanlab H 1541 Ready Mixiä, koostumukseltaan muuten sama kuin komponenteista punnittu, mutta MgCl2 puuttuu (magnesiumin määrä sama kuin reseptissä).

SOC

  • 500 ml SOB (autoklav.) 
  • 10 ml 20 % glucose ( autoklav. ) ICN 194672

Säilytys + 4° C:ssa.

SOB-Mg -medium pH 7,0

  • 20 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 0.58 g NaCl RIEDEL 31434
  • 0.19 g KCl RIEDEL 31248
  •  ad.1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH säädetään 7,0:ksi 5 M NaOH:lla (~ 100ml). Liuos autoklavoidaan. Säilytys + 4° C:ssa.

FSB (FROZEN STORAGE BUFFER)

  • 10 ml 1 M KAc J.T.BAKER 0195
  • 7.4 g KCl RIEDEL 31248
  • 8.91 g MnCl2 x 4 H2O J.T:BAKER 0173
  • 0.8 g Hexaminecobaltchloride FLUKA 52740
  • 100 ml 0.1 M CaCl2 MERCK 2382
  • 100.5 ml 99.5 % glycerol J.T.BAKER 7044
  •  ad. 1000 ml Steriili vesi KABI, NORGE 883314

Säädetään liuoksen pH 6.4:ksi 0.1 M HCl:lla (varovasti pisaroittain). Liuos steriilisuodatetaan. Säilytys + 4° C:ssa.

PB-Medium / TB-Medium

Liuos A:
  • 12 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 24 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 4 ml Glycerol J.T.BAKER 7044
  •  ad. 900 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan.

Liuos B:
  • 2.3 g KH2PO4 MERCK 4871
  • 16.4 g K2HPO4 x 3 H2O MERCK 5099
  •  ad. 100 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Yhdistetään liuokset A ja B.

SOFT-AGAR

(uusi ohje (Savilahti), 1 g enemmän agaria)

  • 8 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 5 g NaCl RIEDEL 31434
  • 8 g Agar HISPANLAB H1800
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Keitetään. Liuos autoklavoidaan. Säilytys + 4° C:ssa.

TOP-AGAR

  • 10 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 5 g NaCl RIEDEL 31434
  • 7 g Agar HISPANLAB H1800
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Keitetään. Liuos autoklavoidaan. Säilytys + 4° C:ssa.

TOP-AGAROSE

  • 10 g T ryptone HISPANLAB H1612
  • 5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 5 g NaCl RIEDEL 31434
  • 7.2 g Agarose ICN 820721
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Keitetään, varo kuohumista. Liuos autoklavoidaan. Säilytys + 4°C:ssa.

NZY AGAR

  • 5 g NaCl RIEDEL 31434
  • 2 g MgSO4´7H2O MERCK 5886
  • 5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 10 g NZ amine (Casamino Acids) BD 223040
  • 15 g Agar HISPANLAB H1800
  •  ad.1000 ml MilliQ H2O 

Säädetään pH 7.5 NaOH:lla. Autoklavoidaan.

NZY+Broth

  • 10 g NZ amine (Casamino Acids) BD 223040
  • 5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 5 g NaCl RIEDEL 31434
  •  ad. <955ml MilliQ H2O 

Säädetään pH 7,5 5 M NaOH:lla (~900 µl), täytä 955 ml:ksi. Autoklavoidaan.

Lisätään:

  • 12,5 ml 1M MgSO4
  • 12,5 ml 1M MgCl2
  • 20 ml 20 % Glucose

Steriilisuodatetaan

BACTO TRYPTOSE PHOSPHATE BROTH

  • 2,5 g Na2HPO4 x 2 H2O J.T.BAKER 0326
  • 20 g Bacto tryptose DIFCO 211711
  • 5 g NaCl RIEDEL 31434
  • 2 g Glucose ICN 194672
  •  ad.1000ml MilliQ H2O 

Säädetään pH 7.3:ksi 5 M HCl:lla (~1 ml). Autoklavoidaan.

DMS-agar pH 5,7

(Saara Lång)

  • 100 g Sucrose J.T.BAKER 194747
  • 1 pussi MS-salts SIGMA-M5524
  • ad. 10 l MilliQ H2O 
  • 80 g Bacto agar DIFCO 214010

Sekoitetaan MS-suolat ja sakkaroosi keskenään. Säädetään pH 5,7:ksi laimealla NaOH:lla (2,5 M ; kuluu n. 1,5 ml). Jaetaan liuos 500 ml ja 1000 ml pulloihin, joihin on ensin punnittu 4 g tai 8 g agaria. Liuos autoklavoidaan.

DMS-maljat

Jäähtyneeseen agariin lisätään kanamysiiniä (varastoliuos SIGMA K-1377 50 mg/ml) haluttu määrä. Valetaan yleensä isoille maljoille (75 ml). Litrasta saadaan noin 12-13 maljaa. Maljoista tehdään mielummin paksumpia kuin liian ohuita.

YT-MEDIUM

Punnitaan komponenteista:

  • 8 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 5 g NaCl RIEDEL 31434
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon. Liuotetaan ja autoklavoidaan. Säilytys + 4° C:ssa.

2 x YT-MEDIUM

  • 16 g Tryptone HISPANLAB H1612
  • 16 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 10 g NaCl RIEDEL 31434
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Punnitaan kaikki aineet suoraan pulloon. Liuotetaan ja autoklavoidaan. Säilytys + 4° C:ssa.

YEP-AGAR

  • 10 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 20 g Bacto peptone OXOID L37
  • 20 g Agar HISPANLAB H1800
  •  900 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan.

YEPD-/YPD -MALJAT

(yeast extract peptone dextroce (dextroce =glucose))

900 ml agaria jäähdytetään + 55° C:ksi. Lisätään 100 ml 20 % glucose. Valetaan maljat (n. 25 ml agaria/malja).

YEPD- /YPD- MALJAT +G418

900 ml agaria jäähdytetään + 55° C:ksi. Lisätään 100 ml 20 % glucose. Lisätään 2ml (100 mg/ml) G418-stokkia. Valetaan maljat ja kääritään folioon.

YEP-MEDIUM

  • 10 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 20 g Bacto peptone OXOID L37
  • 900 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan.

YEPD-/YPD -MEDIUM

900 ml:aan YEP-mediumia lisätään 100 ml 20 % glucose.

YPA-AGAR

  • 10 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 20 g Bacto peptone OXOID L37
  • 20 g Agar HISPANLAB H1800
  • 0.1 g Adenine CALBIOCHEM 1152
  • 900 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan.

YPAD-MALJAT

900 ml agaria jäähdytetään + 55° C:ksi. Lisätään 100 ml 20 % glucose.

YPA -MEDIUM

  • 10 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 20 g Bacto peptone OXOID L37
  • 0.1 g Adenine CALBIOCHEM 1152
  • 900 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan.

YPAD -MEDIUM

900 ml:aan YPA-mediumia lisätään 100 ml 20 % glucose.

SYNTETIC COMPLETE =SC SC-AGAR

  • 20 g Bacto agar DIFCO 214010
  • 800 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan.

SC-MALJAT

800 ml agaria jäähdytetään + 55° C:ksi. Sekoita pyörittäen, älä ravista. Lisätään 40 ml 50 % glucose -> 2% glucose. Lisätään 60 ml haluttua 0.5 x aminohappostokkia (esim. SC-ade). Lisätään 100 ml Yeast Nitrogen Base – stokkia (6.7g/100ml). Valetaan maljat.

SC-MEDIUM

  • 6.7 g Yeast nitrogen base w/o amino acids DIFCO 291920
  • 900 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Lisätään 40 ml 50 % glucose -> 2% glucose. Lisätään 60 ml haluttua 0.5 x aminohappostokkia (esim. SC-ade).

0.5 x SC-Aminohappostokki 600 ml

  • 0.135 g L-adenine CALBIOCHEM 1152
  • 3.48 g L-argine ICN 100730
  • 2.66 g L-asparticacid GIBCO 11016-029/ACROS 105041000
  • 0.58 g L-histidine SIGMA H-9386
  • 0.36 g L-inositol GIBCO 13390-026
  • 5.25 g L-isoleucin ICN 194689
  • 2.62 g L-leucin MERCK 5360
  • 0.91 g L-lycine ICN 194696
  • 1.94 g L-methionine ICN 194707
  • 0.83 g L-phenylalanine FLUKA 78020, SIGMA P-5482
  • 1.05 g L-serine SIGMA S-4500
  • 1.19 g L-threonine ICN 103053
  • 0.82 g L-tryptophane MERCK 8374
  • 0.18 g L-tyrosine ICN 103183
  • 0.22 g L-urasil CALBIOCHEM 6630
  • 1.17 g L-valine ICN 194769
  •  ad. 600ml MilliQ H2O 

Liuos liukenee hitaasti, lämmitetään varovasti tarvittaessa. Liuos steriilisuodatetaan. Stokki säilytetään folioon pakattuna kylmähuoneessa (+4° C). Säilyy n. 1 vuoden.

Mallimerkintä: SC -> kaikki aminohapot
SC-ADE -> ei adeniinia
SC-HIS-LEU -> ei histidiinia, ei leusiinia

0.5 x SC-Aminohappostokki 1000 ml

  • 0.22 g L-adenine CALBIOCHEM 1152
  • 5.8 g L-argine ICN 100730
  • 4.4 g L-asparticacid GIBCO 11016-029/ACROS 105041000
  • 0.96 g L-histidine SIGMA H-9386
  • 0.6 g L-inositol GIBCO 13390-026
  • 8.7 g L-isoleucin ICN 194689
  • 4.36 g L-leucin MERCK 5360
  • 1.5 g L-lycine ICN 194696
  • 3.2 g L-methionine ICN 194707
  • 1.38 g L-phenylalanine FLUKA 78020, SIGMA P-5482
  • 1.74 g L-serine SIGMA S-4500
  • 2 g L-threonine ICN 103053
  • 1.36 g L-tryptophane MERCK 8374
  • 0.3 g L-tyrosine ICN 103183
  • 0.36 g L-urasil CALBIOCHEM 6630
  • 1.9 g L-valine ICN 194769
  •  ad.1000 ml MilliQ H2O 

Liuos liukenee hitaasti, lämmitetään varovasti tarvittaessa. Liuos steriilisuodatetaan. Stokki säilytetään folioon pakattuna kylmähuoneessa (+4° C). Säilyy n. 1 vuoden.

SC-GALAKTOOSI- JA RAFFINOOSIMALJAT

40 Maljaa
  • 20 g Bacto agar DIFCO 214010
  • 6.7 g Yeast nitrogen base w/o amino acids DIFCO 291920
  • ad. 740 ml MilliQ H2O 

Autoklavoidaan. Agar jäähdytetään + 55° C:ksi. Lisätään 100 ml 20 % galactose -> 2% ja lisätään 100 ml 10 % raffinose -> 1%
Lisätään 60 ml haluttua 0.5 x aminohappostokkia. Sekoitetaan pyörittäen, älä ravista. Valetaan maljat.

20 Maljaa
  • 10 g Bacto agar DIFCO 214010
  • 3.35 g Yeast nitrogen base w/o amino acids DIFCO 291920
  •  ad. 370 ml MilliQ H2O 

Autoklavoidaan. Agar jäähdytetään + 55° C:ksi. Lisätään 50 ml 20 % galactose -> 2% ja lisätään 50 ml 10 % raffinose -> 1%
Lisätään 30 ml haluttua 0.5 x aminohappostokkia. Sekoitetaan pyörittäen, älä ravista. Valetaan maljat.

Transformaatio- (TR-) maljat

Pohja-agar
  • 182 g Sorbitol ICN 102938
  • 20 g Agar HISPANLAB H1800
  • 800 ml MilliQ H2O 

Agar autoklavoidaan. Jäähdytetään + 55° C:ksi. 100 ml Yeast Nitrogen Base – stokkia (6.7g/100ml). Lisätään 40 ml 50 % glucose -> 2% glucose. Lisätään 60 ml haluttua 0.5 x aminohappostokkia (esim. SC-ade). Valetaan maljat.

Pinta-agar
  • 18.2 g Sorbitol ICN 102938
  • 3.0 g Agar HISPANLAB H1800
  • 0.67 g YNBDIFCO 291920
  • 90 ml MilliQ H2O 

Agar autoklavoidaan. Lisätään 4 ml 50 % glucose. 6 ml 0.5 x SC-aminohappostokkia. Jäähdytetään + 55° C:ksi. Jaetaan Wasserman-putkiin.

Presporulaatiomaljat
  • 8 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 3 g Bacto peptone OXOID L37
  • 100 g Glucose ICN 194672
  • 20 g Agar HISPANLAB H1800
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Agar autoklavoidaan. Jäähdytetään + 55° C:ksi. Valetaan maljat.

Sporulaatiomaljat
  • 1.0 g Glucose ICN 194672
  • 1.8 g KCl RIEDEL 31248
  • 2.5 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 13,6 g NaAc x 3 H2OMERCK 6267
  • 15 g Agar HISPANLAB H1800
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Agar autoklavoidaan. Jäähdytetään + 55° C:ksi. Valetaan maljat.

Alkon sporulaatiomaljat
  • 5 g KCl RIEDEL 32148
  • 16,59 g NaAc x 3 H2O MERCK 6267
  • 15 g Agar HISPANLAB H1800
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Agar autoklavoidaan. Jäähdytetään + 55° C:ksi. Valetaan maljat.

SD-MALJAT

  • 20 g Bacto agar DIFCO 214010
  • 6,7 g Yeast nitrogen base w/o amino acids DIFCO 291920
  • ad. 800 ml MilliQ H2O 

Lisätään 100 ml haluttua 10 x aminohappostokkia. Säädetään pH 5,8:ksi 5 M NaOH:lla (~pari pisaraa). Liuos autoklavoidaan. Agar jäähdytetään + 55° C:ksi. Lisätään 100 ml 20 % glucose -> 2%. Sekoitetaan pyörittäen, älä ravista. Valetaan maljat.

SD-MEDIUM

  • 6,7 g Yeast nitrogen base w/o amino acids DIFCO 291920
  • ad. 800 ml MilliQ H2O 

Lisätään 100 ml haluttua 10 x aminohappostokkia. Säädetään pH 5,8:ksi NaOH:lla. Liuos autoklavoidaan. Lisätään 100 ml 20 % glucose -> 2%

10 x SD-Aminohappostokki 600 ml

  • 0,12 g L-Adenine hemisulfat salt SIGMA A-9126
  • 0,12 g L-arginine HCl ALDRICH A9,260-0
  • 0,12 g L-histidine HCl BDH 37118/MERCK 4350
  • 0,18 g L-isoleucin ICN 194689
  • 0,6 g L-leucin MERCK 5360
  • 0,18 g L-lycine HCl FLUKA 62930/MERCK 5700
  • 0,12 g L-methionine ICN 194707
  • 0,3 g L-phenylalanine FLUKA 78020/ SIGMA P-5482
  • 1,2 g L-threonine ICN 103053
  • 0,12 g L-tryptophane MERCK 8374
  • 0,18 g L-tyrosine ICN 103183
  • 0,12 g L-urasil MERCK 8460
  • 0,9 g L-valine ICN 194769
  • ad. 600 ml MilliQ H2O 

Liuos liukenee hitaasti, lämmitetään varovasti tarvittaessa. Liuos steriilisuodatetaan. Stokki säilytetään folioon pakattuna kylmähuoneessa (+4° C). Säilyy n. 1 vuoden.

10 x SD-Aminohappostokki 1000ml

  • 0,2 g L-Adenine hemisulfat salt SIGMA A-9126
  • 0,2 g L-arginine HCl ALDRICH A9,260-0
  • 0,2 g L-histidine HCl BDH 37118/MERCK 4350
  • 0,3 g L-isoleucin ICN 194689
  • 1 g L-leucin MERCK 5360
  • 0,3 g L-lycine HCl FLUKA 62930/MERCK 5700
  • 0,2 g L-methionine ICN 194707
  • 0,5 g L-phenylalanine FLUKA 78020/ SIGMA P-5482
  • 2,0 g L-threonine ICN 103053
  • 0,2 g L-tryptophane MERCK 8374
  • 0,3 g L-tyrosine ICN 103183
  • 0,2 g L-urasil MERCK 8460
  • 1,5 g L-valine ICN 194769
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos liukenee hitaasti, lämmitetään varovasti tarvittaessa. Liuos steriilisuodatetaan. Stokki säilytetään folioon pakattuna kylmähuoneessa (+4° C). Säilyy n. 1 vuoden.

SGR-MALJAT

  • 20 g Bacto agar DIFCO 214010
  • 6,7 g Yeast nitrogen base w/o amino acids DIFCO 291920
  • ad. 700 ml MilliQ H2O 

Lisätään 100 ml haluttua 10 x aminohappostokkia. Säädetään pH 5,8:ksi NaOH:lla. Liuos autoklavoidaan. Agar jäähdytetään + 55° C:ksi. Lisätään 100 ml 20 % galactose (ster.suod.) ->2%. Lisätään 100 ml 10 % raffinose (ster.suod.) ->1%. Sekoitetaan pyörittäen, älä ravista. Valetaan maljat.

YNB+glucose –maljat

  • 18 g Bacto agar DIFCO 214010
  •  ad. 800 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Agar jäähdytetään + 55° C:ksi. Lisätään 200 ml 5 x YNB-glucose -stokkia. Valetaan maljat.

YNB+glucose -medium

  • ad. 800 ml MilliQ H2O

Liuos autoklavoidaan. Lisätään 200 ml 5 x YNB-glucose -stokkia

5xYNB-glucose –stokki

  • 1,4 g YNB w/o amino acids & ammonium sulfate DIFCO 0335-15-9
  • 5,0 g Ammonium sulfate MERCK 1217
  • 20 g Glucose ICN 194672
  • ad. 180 ml MilliQ H2O 

Säädetään pH 6,0:ksi 5M NaOH:lla (~130ml) erittäin varovasti, pH nousee erittäin helposti. Täytetään 200 ml:ksi milliQ:lla Steriilisuodatetaan.

BMMY

  • 10 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 20 g Bacto peptone OXOID L37
  • 13,4 g Yeast nitrogen base w/o amino acids DIFCO 291920
  • ad. 800 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan ja jäähdytetään huoneenlämpöön. Lisätään 100 ml 1M Potassium phosphate buffer pH 6,0. 2 ml 500 x B
100 ml 10 x M (5% methanol). Säilytetään +4° C:ssa. Liuos säilyy noin kaksi kuukautta.

BMGY

  • 10 g Yeast extract HISPANLAB H1702
  • 20 g Bacto peptone OXOID L37
  • 13,4 g Yeast nitrogen base w/o amino acids DIFCO 291920
  •  ad. 800 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan ja jäähdytetään huoneenlämpöön. Lisätään 100 ml 1M Potassium phosphate buffer pH 6,0. 2 ml 500 x B 100 ml 10 x GY (1% glycerol). Säilytetään +4° C:ssa. Liuos säilyy noin kaksi kuukautta.

500 x B

  • 20 mg Biotin SIGMA B4639
  • ad. 100 ml MilliQ H2O 

Liuos steriilisuodatetaan. Säilytetään +4° C:ssa. Liuos säilyy noin vuoden.

10 x M

  • 5 ml Methanol RIEDEL 32213
  • ad. 95 ml MilliQ H2O 

Liuos steriilisuodatetaan. Säilytetään +4° C:ssa. Liuos säilyy noin vuoden.

10 x GY

  • 100 ml Glycerol J.T.BAKER 7044
  • ad. 900 ml MilliQ H2O 

Liuos steriilisuodatetaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

DMEM pH 7,4 (Dulbecco’s modified eagle’s medium)

Ready mixistä: SIGMA D-7777 (10 l)
Pulveri liuotetaan 9 litraan steriiliä vettä (purkki huuhdellaan). Lisätään 37 g NaHCO3 (J.T.BAKER 0263) ja annetaan liueta. Säädetään pH 7,2:ksi 5 M HCl:lla (~3 ml), täytetään 10 l:ksi ja steriilisuodatetaan heti (90 mm, 0,22 mm) 0,5 l C-pulloihin. Korkkien ympärille laitetaan parafilmiä.

MEM pH 7,2 (Minimum essential medium)

Ready mixistä: GIBCO 61100-087 (10 l)
Pulveri liuotetaan 9 litraan steriiliä vettä (purkki huuhdellaan). Lisätään 22 g NaHCO3 (J.T.BAKER 0263) ja annetaan liueta. Säädetään pH 7,2:ksi 5 M HCl:lla (~3 ml), täytetään 10 l:ksi ja steriilisuodatetaan heti (90 mm, 0,22 mm) 0,5 l C-pulloihin. Korkkien ympärille laitetaan parafilmiä.

MEM + 0,2% BSA pH 7,2

Ready mixistä: GIBCO 61100-087 (10 l)
Pulveri liuotetaan 9 litraan steriiliä vettä (purkki huuhdellaan). Lisätään 22 g NaHCO3 (J.T.BAKER 0263) ja annetaan liueta. Säädetään pH 7,2:ksi 5 M HCl:lla (~3 ml), täytetään 10 l:ksi ja steriilisuodatetaan heti (90 mm, 0,22 mm) 0,5 l C-pulloihin. Korkkien ympärille laitetaan parafilmiä.

RPMI 1640 MODIFIED pH 7,0

Ready mixistä: ICN 1060122 (10 l)
Pulveri liuotetaan 9 litraan steriiliä vettä (purkki huuhdellaan). Lisätään 8,5 g NaHCO3 (J.T.BAKER 0263) ja annetaan liueta. Säädetään pH 7,0:ksi 5 M HCl:lla (~2 ml), täytetään 10 l:ksi ja steriilisuodatetaan heti (90 mm, 0,22mm) 0,5 l C-pulloihin. Korkkien ympärille laitetaan parafilmiä.

SF-900 II SFM-medium pH 6,2 – 6,3

Ready mixistä: GIBCO 20903-035 (10 l)
Pulveri liuotetaan 9 litraan steriiliä vettä. Lisätään 8 ml suplementtia (lämmitetään vesihauteessa hiukan) ja säädetään pH 5,9:ksi 5 M NaOH:lla (~35 ml). Lisätään 3,5 g NaHCO3 (J.T.BAKER 0263), annetaan liueta ja täytetään lähelle merkkiä. Säädetään pH 6,2:ksi 5 M NaOH:lla (~3 ml), täytetään 10 l:ksi ja steriilisuodatetaan heti (2 x 90 mm, 0,22 mm) C-pulloihin. Korkkien ympärille laitetaan parafilmiä.

TNM-FH-insect medium pH 6,1

Ready mixistä: SIGMA T-1032 (10 l)
Pulveri liuotetaan 9 litraan steriiliä vettä (purkki huuhdellaan). Lisätään 3,5 g NaHCO3 (J.T.BAKER 0263), annetaan liueta ja täytetään lähelle merkkiä. Säädetään pH 5,9:ksi 5 M NaOH:lla, täytetään 10 l:ksi ja steriilisuodatetaan heti (2 x 90 mm, 0,22 mm) C-pulloihin. Korkkien ympärille laitetaan parafilmiä.

Dulbecco 10 l

Liuos A:
  • 1.0 g MgCl2 x 6 H2O MERCK 5833
  • 1.0 g CaCl2 MERCK 2083
  •  Ad. 5 l MilliQ H2O
Liuos B: (=1 litra 10 x PBS:ää) 
  • 80 g NaCl RIEDEL 31434
  • 2 g KCl RIEDEL 31248
  • 14 g Na2HPO4 x 2 H2O J.T.BAKER 0326
  • 2 g KH2PO4 J.T.BAKER 0241
  •  Ad. 3 l MilliQ H2O 

Liuokset A ja B liuotetaan erikseen. Jos käytetään valmista 10xPBS-liuosta, se lisätään sellaisenaan liuokseen A. Liuokset yhdistetään 10 l:ksi. Liuos steriilisuodatetaan (90 mm, 0,22mm) C-pulloihin.

Dulbecco + 0,2 % BSA 10 l

liuos A
liuos B
  • 20 g BSA SIGMA A-3912
  •  Ad. 10 l MilliQ H2O 

Liuokset A ja B liuotetaan erikseen ja lisätään BSA. Liuos steriilisuodatetaan (90 mm, 0,22mm) C-pulloihin. Vaahtoaa suodatettaessa.

Trypsin-EDTA pH 7,4 (2,5 l)

Liuos A:
  • 1,25 g Trypsin 1:250 DIFCO 0152-15
  • 0,5 g EDTA J.T.BAKER 1073
  •  Liuotetaan ~ 500 ml:aan steriiliä vettä. 
Liuos B:
  • 20 g NaCl RIEDEL 31434
  • 1 g KCl RIEDEL 31248
  • 0,875 g NaHCO3 J.T.BAKER 0263
  • 2,5 g Glucose ICN 194672
  • 0,013 g Fenolipuna MERCK 7241

Liuotetaan ~1500 ml:aan steriiliä vettä. Yhdistetään liuokset A ja B. Lisätään steriili vesi merkkiin (2,5 l) ja säädetään pH 7,4:ksi 5 M NaOH:lla (~100 ml). Liuos steriilisuodatetaan (90 mm, 0,22 mm) C-pulloihin (200 ml & 100 ml). Korkkien ympärille laitetaan parafilmiä. ·

 

10 x Boraattipuskuri

  • 108 g Tris ICN 819638
  • 55 g Boorihappo J.T.BAKER 0055
  • 9,3 g EDTA J.T.BAKER 1073
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Ei steriloida. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M CaCl2

  • 147,02 g CaCl2 x 2H2O MERCK 2382
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M Citric Acid

  • 210,4 g Citric Acid x H2O ICN 150699
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

100 x Denhart’s

  • 20 g Ficoll PHARMACIA BIOTECH 17-0400-01
  • 20 g Polyvinylpyrrolidone ICN 102786
  • 20 g BSA SIGMA A-3912
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liukenee hitaasti. Liuos steriilisuodatetaan (hidas). Säilytetään + 4º C:ssa.

0,5 M EDTA pH 7,5/8,0

  • 186,12 g EDTA J.T.BAKER 1073
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Säädetään pH 7,5:ksi kiinteällä NaOH:lla (~g). Säädetään pH 8,0:ksi kiinteällä NaOH:lla (~ 20 g). EDTA liukenee vasta, kun pH nousee tarpeeksi. Autoklavoidaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

10 x E-PUSKURI pH 8,05

  • 48,44 g Tris ICN 819638
  • 27,22 g CH3COONa x 3H2O MERCK 6267
  • 3,72 g EDTA J.T.BAKER 1073
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH säädetään 8.05:ksi väkevällä etikkahapolla (~ 15 ml). Liuosta ei autoklavoida eikä steriilisuodateta. Säilytetään huoneenlämmössä.

12,5 % EDTA+2,5 %PFA pH 7,2

  • 125 g EDTA J.T.BAKER 1073

Lisätään lämmintä steriiliä 1 x PBS:ää ~500 ml ja NaOH-rakeita, kunnes kirkastuu (~15 g)

  • 25 g PFA J.T.BAKER 1157

Lisätään kylmää steriiliä 1 x PBS:ää. ~300 ml. Liukenee 60 °C:ssa. Ei kuitenkaan anneta lämmitä yli 65 °C:seen (leimahdusvaara). Suojaudutaan (nitriilihanskat ja hengityssuoja), kun punnitaan ja käsitellään PFA:ta. Työ tehdään vetokaapissa. Kun PFA on liuennut, jäähdytetään huoneenlämpöön (nopeutetaan jäähauteella) ja säädetään pH väkevällä HCl:lla 7,2:ksi. Täytetään litraksi. Suodatetaan vesi-imulla.

20 % Galaktoosi

  • 200 g Galactose ICN 194670
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Lisätään lämpimään milliQ veteen. Liuos steriilisuodatetaan (hidas). Säilytetään + 4º C:ssa.

20 % Glukoosi

  • 200 g Glucose ICN 194672
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Lisätään lämpimään milliQ veteen. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

50 % Glukoosi

  • 500 g Glucose ICN 194672
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Lisätään lämpimään milliQ veteen. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

Halomedium pH 7,2 (Ohje Veli-Pekka Jaakola)

  • 280 g NaCl RIEDEL 31434
  • 2,3 g KCl RIEDEL 31248
  • 3,5 g Na-citrate x 2H2O RIEDEL 32320
  • 0,16 g CaCl2 MERCK 2083
  • 23 g MgSO4 x 7 H2O MERCK 5886
  • 16,67 ml 3 M Tris-HCl pH 7,5 
  • ad. 1000 ml vesijohtovesi 

Liukenee vasta, kun liuoksen pinta on lähellä merkkiä. pH säädetään 7,2:ksi väkevällä HCl:lla (~0,5ml). Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

5 M HCl

  • 414,04 ml HCl RIEDEL 30721
  • ad. 586,96 ml MilliQ H2O 

ENSIN VESI, sitten happo. Ei steriloida. Jaetaan muovipulloihin. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M Hepes pH 7,2/8,0

  • 238,3 g Hepes ICN 101926
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Hepes lisätään milliQ veteen hitaasti erissä. pH säädetään 7,2:ksi kiinteällä KOH:lla (~10 g). pH säädetään 8,0:ksi kiinteällä KOH:lla (~25 g). Liuos steriilisuodatetaan (hidas). Säilytetään huoneenlämmössä.

3 M KAc pH 4,8

  • 294,4 g CH3COOK J.T.BAKER 0195
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH säädetään pH 4,8:ksi väkevällä muurahaishapolla (Formic acid J.T.BAKER 6037) (~ 90 ml). Huomioidaan, että vesi laskee pH:ta. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

3,5 M KCl

  • 260,94 g KCl RIEDEL 31248
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

5 x MAB pH 7,5

  • 58,04 g Maleic Acid ICN 102232
  • ad. 800 ml MilliQ H2O 

Säilytetään + 4º C:ssa. Lisätään ~ 800 ml MilliQ H2O. Säilytetään + 4º C:ssa. pH säädetään 7,5:ksi NaOH-kiteillä (~ 40g)

  • 43,84 g NaCl RIEDEL 31434

Tarkistetaan pH ja säädetään tarvittaessa (NaCl laskee pH:ta vähän). Täytetään litraksi. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä. Säilyvyys rajoitettu.

0,5 M Maleic Acid pH 7,5

  • 58,04 g Maleic Acid ICN 102232
  • 40,0 g NaOH J.T.BAKER 0402
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

ENSIN VESI, sitten happo. NaOH lisätään vasta kun happo on liuennut. pH säädetään 7,5:ksi 5 M NaOH:lla (~1 ml). Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M MgSO4

  • 246,48 g MgSO4 x 7 H2O MERCK 5886
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M MgCl2

  • 203,3 g MgCl2 x 6 H2O MERCK 5833
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

Minimisuolat

  • 26,6 g K2HPO4 x 3 H2O MERCK 5099
  • 9 g KH2PO4 MERCK 4871
  • 2 g (NH4)2SO4 MERCK 1217
  • 1 g Na-citrate x 2H2O RIEDEL 32320
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

10 x MOPS pH 7,0

  • 41,86 g MOPS DUCHEFA M1502
  • 20 ml 0,5 M EDTA pH 7,5 
  • 6,8 g CH3COONa x 3H2O MERCK 6267
  • 21,5 ml 5 M NaOH 
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH säädetään 7,0:ksi väkevällä etikkahapolla (~ 2ml). Liuos steriilisuodatetaan ja pakataan foliopaperiin. Säilytetään huoneenlämmössä.

3 M NaAc pH 5,2/7,5

  • 408,24 g CH3COONa x 3H2O MERCK 6267
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH säädetään 5,2:ksi (~85 ml väkevää etikkahappoa) tai 7,5:ksi väkevällä etikkahapolla tai KOH:lla. Huomioidaan, että vesi laskee pH:ta. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

2 M Na-citrate

  • 588,2 g Na-citrate x 2H2O RIEDEL 32320
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Lämmittäminen nopeuttaa liukenemista. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

5 M NaCl

  • 292,2 g NaCl RIEDEL 31434
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Suodatetaan vesi-imulla tarvittaessa. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M Na2HPO4

  • 177,99 g Na2HPO4 x 2H2O J.T.BAKER 0326
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Lisätään lämpimään veteen, kiteytyy helposti. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M NaH2PO4

  • 137,99 g NaH2PO4 x H2O MERCK 6346
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M NaHCO3 pH 8.5

  • 84 g NaHCO3 J.T.BAKER 0263
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

pH säädetään 8,5:ksi 5 M NaOH:lla (~7,5 ml). Liukenee, vasta kun pH on 8,3. Liuos steriilisuodatetaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

5 M NaOH

  • 200 g NaOH J.T.BAKER 0402
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Valmistetaan muovidekassa. Lisätään NaOH vähitellen (kuumenee). Ei steriloida. Jaetaan muovipulloihin. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 x PBS (Phosphate-buffer saline)

  • 8,0 g NaCl RIEDEL 31434
  • 0,2 g KCl RIEDEL 31248
  • 1,4 g Na2HPO4 x 2H2O J.T.BAKER 0326
  • 0,2 g KH2PO4 MERCK 4871
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä. Vaihtoehtoisesti: lisätään 1litraan 10x PBS:ää 9 litraa milliQ:ta.

10 x PBS

  • 80 g NaCl RIEDEL 31434
  • 2 g KCl RIEDEL 31248
  • 14 g Na2HPO4 x 2H2O J.T.BAKER 0326
  • 2 g KH2PO4 MERCK 4871
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

4 % PFA tai 20 % PFA

4 % PFA
40 g PFA J.T.BAKER 1157

20 % PFA
200 g PFA J.T.BAKER 1157

Lisätään lämmintä ja kylmää steriiliä 1 x PBS:ää ~900 ml. Liukenee 60° C:ssa. Ei kuitenkaan anneta lämmitä yli 65° C:seen (leimahdusvaara). Täytetään litraksi. Suojaudutaan (nitriilihanskat ja hengityssuoja), kun punnitaan ja käsitellään PFA:ta. Työ tehdään vetokaapissa. 20 % PFA:ssa saa jäädä muutamia liukenemattomia murusia. Suodatetaan vesi-imulla.

1 M Potassium phosphate buffer pH 6,0

  • 868 ml 1 M KH2PO4 
  • ~132 ml 1 M K2HPO4 

Säädetään 1 M KH2PO4 -liuoksen pH 6,0:ksi 1 M K2HPO4:lla. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

10 % Raffinoosi

  • 100 g Raffinose ICN 102797
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Lisätään lämpimään milliQ veteen. Liuos steriilisuodatetaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

RENA pH 7,5

  • 121 g Tris ICN 819638
  • 87 g NaCl RIEDEL 31434
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH säädetään 7,5:ksi väkevällä HCl:lla (~60 ml). Ei steriloida.

10 x Running-buffer (10 x Laemmli)

  • 30 g Tris ICN 819638
  • 144 g Glycine MERCK 4201
  • 10 g SDS GIBCO 15525-017
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Ei steriloida. Säilytetään huoneenlämmössä.

Ready mixistä: Liuotetaan TG-SDS-buffer (DUCHEFA T1510) 10 litraan milliQ:ta.

10 % Sakkaroosi

  • 100 g Sucrose ICN 194747
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos steriilisuodatetaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

20 % SDS

  • 200 g SDS GIBCO 15525-017
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Lämmitetään varovasti. Liuos steriilisuodatetaan (tehdään myös ei-steriilinä). Säilytetään huoneenlämmössä.

SM-LAMBDA-medium

  • 5,8 g NaCl RIEDEL 31434
  • 2,0 g MgSO4 x 7 H2O MERCK 5886
  • 16,7 ml 3 M Tris-HCl pH 7,5 
  • 0,2 g Gelatin DIFCO 0143-17 ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

1 M Sodiumphosphate buffer pH 7,4

  • 4000 ml 1 M Na2HPO4
  • ~500 ml 1 M NaH2PO4

Säädetään 1 M Na2HPO4 -liuoksen pH 7,4:ksi 1 M NaH2PO4:lla. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M Sodiumcitrate buffer pH 4,0

  • 550 ml 1 M Na-citrate
  • ~450 ml 1 M Citric acid

Säädetään 1 M Na-citrate -liuoksen pH 4,0:ksi 1 M Citric Acid:lla. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

20 x SSC

  • 175,32 g NaCl RIEDEL 31434
  • 88,23 g Na-citrate x 2H2O RIEDEL 32320
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

Vaihtoehtoisesti Ready mixistä (kallis): Liuotetaan SSC-buffer (DUCHEFA S1511) 10 litraan milliQ:ta.

20 x SSPE pH 7,4

  • 210 g NaCl RIEDEL 31434
  • 28,48 g Na2HPO4 x 2H2O J.T.BAKER 0326
  • 4,8 g NaH2PO4 x H2O MERCK 6346
  • 40 ml 0,5 M EDTA pH 7,5 
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH 7,4 säädetään 5 M NaOH:lla (6-7 ml). Liuos autoklavoidaan. Säilytetään + 4º C:ssa.

50 x TAE pH 8,0

  • 242 g Tris ICN 819638
  • 57,1 ml väkevä etikkahappo RIEDEL 33209
  • 100 ml 0,5 M EDTA pH 8,0 
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH säädetään 8.0:ksi väkevällä etikkahapolla (noin 40 ml/l). Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

10 x TBE

  • 121,1 g Tris ICN 819638
  • 61,83 g Boorihappo J.T.BAKER 0055
  • 7,44 g EDTA J.T.BAKER 1073
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

Ready mixistä: Liuotetaan TBE-buffer (DUCHEFA T1507) 10 litraan milliQ:ta.

10 x TBS pH 7,4

  • 30 g Tris ICN 819638
  • 80 g NaCl RIEDEL 31434
  • 2 g KCl RIEDEL 31248
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Liuoksen pH säädetään väkevällä HCl:lla 7,4:ksi (~18 ml). Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

10 x TE pH 7,5

  • 33,3 ml 3 M Tris-HCl pH 7,5
  • 20 ml 0,5 M EDTA pH 7,5
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O

Tarkistetaan liuoksen pH ja säädetään tarvittaessa 5 M HCl:lla (~600 ml, lähtöpH 7,63) tai NaOH:lla. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

10 x TE pH 8,0

  • 33,3 ml 3 M Tris-HCl pH 8,0
  • 20 ml 0,5 M EDTA pH 8,0
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O

Tarkistetaan liuoksen pH ja säädetään tarvittaessa 5 M HCl:lla (1 ml, lähtöpH 8,19) tai NaOH:lla. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M TEA pH 8,0 in DEPC MilliQ

  • 298,38 g Triethaloamin RIEDEL 33729
  • ad. 2000 ml depc MilliQ H2O 

Haetaan situastiat hansikkaat kädessä: 2 l dekka, 100 ml mittalasi, magneetti ja lusikka. Liuos valmistetaan hansikkaat kädessä.
Lisätään 1800 ml depc milliQ H2O. Säädetään pH väkevällä HCl:lla. Käytetään mittalasia alkusäätöön ja muovipipettiä lopussa. Kulutus on ~70 ml (alkupH ~11). pH:n säätö tapahtuu hitaasti lämpenemisen takia. Liuos pullotetaan samoihin pulloihin, mistä depc milliQ H2O on otettu. Liuos autoklavoidaan depc-ajossa.

1 M Tris-HCl pH 9,5

  • 121,14 g  Tris ICN 819638
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Lisätään n. 800 ml milliQ:ta. Säädetään pH 9,5:ksi väkevällä HCl:lla (~ 7 ml). Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

1 M Tris-HCl pH 8,0 in DEPC MilliQ

  • 121,14 g Tris SIGMA T-1503
  •  ad. 2000 ml depc MilliQ H2O 

Haetaan situastiat hansikkaat kädessä: 1 l dekka, 50 ml mittalasi, magneetti ja lusikka. Liuos valmistetaan hansikkaat kädessä.
Lisätään 750 ml depc milliQ H2O. Säädetään pH väkevällä HCl:lla. Käytetään mittalasia alkusäätöön ja muovipipettiä lopussa. Kulutus on ~40 ml. pH:n säätö tapahtuu hitaasti lämpenemisen takia. Liuos pullotetaan samoihin pulloihin, mistä depc milliQ H2O on otettu. Liuos autoklavoidaan.

3 M Tris-HCl

  • 363,42 g Tris ICN 819638
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Säädetään pH 6,8:ksi väkevällä HCl:lla (~ 250 ml). Säädetään pH 7,0:ksi väkevällä HCl:lla (~ 230 ml). Säädetään pH 7,5:ksi väkevällä HCl:lla (~ 212 ml). Säädetään pH 8,0:ksi väkevällä HCl:lla (~ 140 ml). Säädetään pH 8,8:ksi väkevällä HCl:lla (~ 70 ml). Liukenee vasta, kun HCl:a on lisätty. pH:n säätö tapahtuu hitaasti lämpenemisen takia. Liuos autoklavoidaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

Tyrode’s solution –Ca-Mg-vapaa

  • 8,0 g NaCl RIEDEL 31434
  • 0,2 g KCl RIEDEL 31248
  • 0,05 g NaH2PO4 x H2O MERCK 6346
  • 1,0 g Glucose ICN 194672
  • 1,0 g NaHCO3 J.T.BAKER 0263
  •  ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Säädetään pH 7,2:ksi tai 7,4:ksi NaOH:lla. Liuos steriilisuodatetaan. Säilytetään huoneenlämmössä.

Western blotting buffer

  • 3 g Tris ICN 819638
  • 14,4 g Glycine MERCK 4201
  • 200 ml Metanoli RIEDEL 32213
  • ad. 1000 ml MilliQ H2O 

Ei steriloida. Säilytetään huoneenlämmössä.